分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室常用的精密儀器，在醫(yī)院中有著廣泛的應(yīng)用，主要用于測量溶液的濃度。分光光度計(jì)屬于計(jì)量強(qiáng)制檢定項(xiàng)目，檢定周期應(yīng)＜1年。目前的檢定規(guī)程為中華人民共和國國家計(jì)量檢定規(guī)程“紫外、可見、近紅外分光光度計(jì)檢定規(guī)程”該規(guī)程對自動(dòng)掃描型儀器的檢定方法描述并不多，有些參數(shù)不可設(shè)置，在此介紹一些檢定技巧。

   吸收池配套性：分光光度計(jì)的吸收池是成對配套，分為玻璃和石英兩種材質(zhì)。由于玻璃吸收紫外光，其適用波長為400～2000nm；石英適用波長為180～3000 nm。按照檢定規(guī)程，配對的吸收池透射比的差值≤0.5%。為保證其配套性，2個(gè)吸收池盡量同時(shí)使用，注意保養(yǎng)。使用時(shí)樣品液應(yīng)達(dá)到2/3的高度，且注意不要溢出。使用完后用蒸餾水清洗同樣的次數(shù)，拭鏡紙單向擦干。一般使用1年后吸收池的配套性會(huì)變差，應(yīng)重新配對。

   基線平直度調(diào)整：基線平直度是指掃描透射比為100和0時(shí)基線傾斜或彎曲的程度。如果基線的平直性差，就會(huì)使樣品的吸收光譜中各吸收峰之間的比值發(fā)生變化，給定性分析造成錯(cuò)誤。導(dǎo)致基線不平直的主要原因是儀器的光學(xué)系統(tǒng)失調(diào)，兩光束不平衡。如儀器受震動(dòng)，光源位置變動(dòng)等都會(huì)引起光學(xué)系統(tǒng)故障(基線平直度要以吸光度表示)。有些設(shè)備對基線平直非常敏感，容易超

出規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)，因此在進(jìn)行此項(xiàng)測量時(shí)要使機(jī)器充分預(yù)熱，光譜帶寬設(shè)為2 nm，并且在儀器遮光罩關(guān)閉后穩(wěn)定2min后再進(jìn)行波長掃描。

   光譜帶寬調(diào)整：規(guī)程中對噪聲、漂移、最小光譜帶寬和基線平直度幾個(gè)項(xiàng)目的測定需要調(diào)整光譜帶寬。光譜帶寬是由狹縫寬度決定，理論上，光柵型儀器當(dāng)狹縫寬度小于衍射寬度時(shí)，光譜帶寬由衍射寬度決定；當(dāng)狹縫寬度大于衍射寬度時(shí)，光譜帶寬由狹縫寬度決定。狹縫越小，得到的單色光越純，但光的強(qiáng)度降低。目前有很多儀器為固定光譜帶寬，而規(guī)程規(guī)定在測量時(shí)設(shè)置為2 nm，固定光譜帶寬儀器可不設(shè)。事實(shí)上，當(dāng)光譜帶寬不能設(shè)置時(shí)，容易使光電流的噪聲偏大。

   掃描速度選擇：進(jìn)行波長最大允許誤差的測量時(shí)，需要對氧化鈥濾光片進(jìn)行波長掃描。為節(jié)省時(shí)間，設(shè)定波長范圍只需包含所要同標(biāo)準(zhǔn)值對比的波峰波谷即可。首先要對照上一次的檢測報(bào)告或儀器說明書明確儀器波長重復(fù)性，設(shè)置使采樣間隔小于波長重復(fù)性的掃描速度。如果不能設(shè)定采樣間隔，則應(yīng)設(shè)定掃描速度＜120 nm/min。進(jìn)行基線平直度測量時(shí)，全波段掃描的速度應(yīng)選擇采樣間隔為1 nm的速度，若不能設(shè)置，則可選擇400～800 nm/min。

   波長分段與儀器級別：在紫外、可見、近紅外分光光度計(jì)檢定規(guī)程中，增加了對儀器的工作波長及儀器性能級別的劃分。其工作波長分為A段、B段和C段。儀器性能從高到低分為4個(gè)級別，即I級、II級、III級、IV級。儀器的每一項(xiàng)計(jì)量指標(biāo)均應(yīng)根據(jù)級別劃分標(biāo)準(zhǔn)。因此，應(yīng)對照規(guī)程在計(jì)量證書中給出每項(xiàng)指標(biāo)在每個(gè)波段的儀器級別，以方便使用者對儀器性能有更好的判斷。

   光學(xué)器件的維護(hù)與保養(yǎng)：光學(xué)器件忌灰塵和觸摸，要保證使用環(huán)境的清潔，濾光片使用完后要及時(shí)放回暗盒中。如光學(xué)器件粘有少量灰塵，可用小功率吸塵器處理。當(dāng)環(huán)境濕度過大或PM2.5含量過高，也會(huì)對測量準(zhǔn)確度造成影響。分光光度計(jì)屬于精密儀器應(yīng)盡量避免搬動(dòng)，以免造成光路的輕微改變，儀器不用時(shí)應(yīng)關(guān)閉電源，延長其光源壽命。

   分光光度計(jì)的檢定是一項(xiàng)科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)和細(xì)致的工作。由于該儀器是光學(xué)精密儀器，測量結(jié)果極易受到濕度、灰塵、振動(dòng)及霉斑等偶然因素的干擾，實(shí)踐中要區(qū)分是分光光度計(jì)本身的問題還是偶然因素導(dǎo)致的誤差等各種問題，嚴(yán)格遵守檢定規(guī)程規(guī)定流程和檢測環(huán)境的要求正確使用、保養(yǎng)儀器。同時(shí)，加強(qiáng)對使用人員的培訓(xùn)也是保證儀器正常運(yùn)行、測量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠的重要途徑。